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核酸提取儀是提取各類病毒,包括新冠病毒的重要工具,核酸提取儀在分子診斷各領(lǐng)域中的作用日益凸顯,而上述技術(shù)首先面臨的問題就是如何從復(fù)雜的樣本中快速有效的提取核酸,傳統(tǒng)的酚氯仿、離心柱方法逐漸不能滿足客戶的需求,磁珠法核酸提取技術(shù)應(yīng)運而生,解決了傳統(tǒng)方法不能實現(xiàn)的自動化、高通量等問題。而磁珠法自動化核酸提取技術(shù)包含三個重要組成:1、磁珠,2、試劑,3、自動核酸提取儀,本文著重闡述如何驗證核酸提取儀與核酸提取磁珠的兼容性或匹配程度。
一、磁性驗證
磁性驗證是對儀器的磁性能進行測試,磁棒是核酸提取儀的核心部件,飽和磁化強度是核酸提取磁珠的重要性能參數(shù),兩者相互匹配才能使自動化核酸提取過程***運轉(zhuǎn)。為此可以設(shè)置空白實驗來驗證特定磁珠與核酸提取儀的匹配程度。
實驗流程:以吉恩特02系列磁珠、GNT-Mini16核酸提取儀為例
1、核酸提取磁珠搖勻后向1孔位加入500微升磁珠懸液,
2、2-6孔位加入500微升超純水
3、具體參數(shù)設(shè)置見圖片
4、實驗運行完畢之后將第6孔的核酸提取磁珠磁珠懸液完全吸出轉(zhuǎn)移到已稱重的EP管中,在磁力架上吸棄上清,EP管開蓋烘干恒重,與實際加入磁珠量對照,得出核酸提取儀與該磁珠在轉(zhuǎn)移磁珠能力上的匹配程度。
實驗結(jié)果:吉恩特02系列磁珠、GNT-Mini16磁珠回收率在99%以上。
二、孔間差異
儀器孔位間的提取效率是由多重因素影響,加熱部件、震動部件,工作臺面的平整度等等,反應(yīng)到數(shù)據(jù)上面造成各孔位之間提取效率的差異。為了排除其他因素(試劑、樣品)的干擾,盡量只考察核酸提取儀的性能,選用核酸純化試劑盒與已知樣品濃度的DNA來驗證。
實驗流程:
1、5孔位加入GNT-00205核酸提取磁珠 5微升和超純水 200微升,
2、1孔位加入50微升DNA溶液與100微升結(jié)合液,
3、2孔位加入400微升洗滌液,
4、6孔位加入50微升洗脫液
5、具體實驗流程見下圖
實驗結(jié)果:
結(jié)論:
GNT-00205核酸提取磁珠與GNT-Mini16在DNA純化實驗中的孔間方差為0.0263,孔間差異較小。
上述兩個實驗完成之后,可以進行其他樣本的實驗,進一步檢驗核酸提取磁珠與儀器在復(fù)雜環(huán)境下穩(wěn)定性,如全血樣本、植物樣本、動物組織樣本等等,實驗中應(yīng)注意采用同一樣本,或者將多個單個樣本前處理以后混勻成為一個樣本,以此來檢驗儀器的穩(wěn)定性以及磁珠在此復(fù)雜環(huán)境下與整體試劑、樣本的契合程度。
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