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核酸提取儀是提取各類病毒,包括新冠病毒的重要工具,核酸提取儀在分子診斷各領(lǐng)域中的作用日益凸顯,而上述技術(shù)首先面臨的問題就是如何從復(fù)雜的樣本中快速有效的提取核酸,傳統(tǒng)的酚氯仿、離心柱方法逐漸不能滿足客戶的需求,磁珠法核酸提取技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生,解決了傳統(tǒng)方法不能實(shí)現(xiàn)的自動化、高通量等問題。而磁珠法自動化核酸提取技術(shù)包含三個重要組成:1、磁珠,2、試劑,3、自動核酸提取儀,本文著重闡述如何驗(yàn)證核酸提取儀與核酸提取磁珠的兼容性或匹配程度。
一、磁性驗(yàn)證
磁性驗(yàn)證是對儀器的磁性能進(jìn)行測試,磁棒是核酸提取儀的核心部件,飽和磁化強(qiáng)度是核酸提取磁珠的重要性能參數(shù),兩者相互匹配才能使自動化核酸提取過程***運(yùn)轉(zhuǎn)。為此可以設(shè)置空白實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證特定磁珠與核酸提取儀的匹配程度。
實(shí)驗(yàn)流程:以吉恩特02系列磁珠、GNT-Mini16核酸提取儀為例
1、核酸提取磁珠搖勻后向1孔位加入500微升磁珠懸液,
2、2-6孔位加入500微升超純水
3、具體參數(shù)設(shè)置見圖片
4、實(shí)驗(yàn)運(yùn)行完畢之后將第6孔的核酸提取磁珠磁珠懸液完全吸出轉(zhuǎn)移到已稱重的EP管中,在磁力架上吸棄上清,EP管開蓋烘干恒重,與實(shí)際加入磁珠量對照,得出核酸提取儀與該磁珠在轉(zhuǎn)移磁珠能力上的匹配程度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:吉恩特02系列磁珠、GNT-Mini16磁珠回收率在99%以上。
二、孔間差異
儀器孔位間的提取效率是由多重因素影響,加熱部件、震動部件,工作臺面的平整度等等,反應(yīng)到數(shù)據(jù)上面造成各孔位之間提取效率的差異。為了排除其他因素(試劑、樣品)的干擾,盡量只考察核酸提取儀的性能,選用核酸純化試劑盒與已知樣品濃度的DNA來驗(yàn)證。
實(shí)驗(yàn)流程:
1、5孔位加入GNT-00205核酸提取磁珠 5微升和超純水 200微升,
2、1孔位加入50微升DNA溶液與100微升結(jié)合液,
3、2孔位加入400微升洗滌液,
4、6孔位加入50微升洗脫液
5、具體實(shí)驗(yàn)流程見下圖
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
結(jié)論:
GNT-00205核酸提取磁珠與GNT-Mini16在DNA純化實(shí)驗(yàn)中的孔間方差為0.0263,孔間差異較小。
上述兩個實(shí)驗(yàn)完成之后,可以進(jìn)行其他樣本的實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步檢驗(yàn)核酸提取磁珠與儀器在復(fù)雜環(huán)境下穩(wěn)定性,如全血樣本、植物樣本、動物組織樣本等等,實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意采用同一樣本,或者將多個單個樣本前處理以后混勻成為一個樣本,以此來檢驗(yàn)儀器的穩(wěn)定性以及磁珠在此復(fù)雜環(huán)境下與整體試劑、樣本的契合程度。
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