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          全自動(dòng)核酸提取儀的常見問題分析

          作者: 發(fā)布時(shí)間:2022-10-12 瀏覽次數(shù):9909
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                核酸提取儀是自動(dòng)化提取的良好途徑,隨著磁珠法核酸提取技術(shù)的日益普及,基于磁珠法核酸提取開發(fā)的全自動(dòng)核酸提取儀,因其高通量、自動(dòng)化、減少操作者與試劑及樣本的接觸、減少人工操作引起的誤差,結(jié)果穩(wěn)定,重復(fù)性好等特點(diǎn)使得全自動(dòng)核酸提取儀越來越被市場(chǎng)所接受。目前市場(chǎng)上基于磁珠法的核酸提取儀大致可分為兩類:移液式和磁棒式。

                 本文***介紹磁棒式全自動(dòng)核酸提取儀在實(shí)際操作中的問題,及相應(yīng)的解決方案。

                 1、手工提取與上機(jī)提取的結(jié)果存在顯著差異

                 磁棒式全自動(dòng)核酸提取儀通常采用磁保護(hù)套(攪拌套)來轉(zhuǎn)移磁珠和混勻液體,深孔板底部采用加熱模塊加熱深孔板孔內(nèi)的液體,從而模擬手工操作的流程。手工提取的實(shí)驗(yàn)結(jié)果只能說明手工操作流程及試劑質(zhì)量沒有問題,轉(zhuǎn)移到儀器上后,要綜合考慮。

                 用磁珠對(duì)核酸進(jìn)行提取時(shí),常規(guī)的操作流程是:裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫,在手工操作時(shí)都可以分步驟實(shí)現(xiàn),而在上機(jī)操作時(shí)考慮到避免人工操作,通常會(huì)把裂解與結(jié)合放在一個(gè)孔位內(nèi)進(jìn)行,客戶一般會(huì)采用醇類作為結(jié)合液,這樣操作不但稀釋了裂解液,還影響裂解效率,而且由于孔位內(nèi)液體溫度不斷升高,導(dǎo)致醇類揮發(fā),也影響結(jié)合效率。此外,全自動(dòng)核酸提取儀一般采用底部加熱模式,孔位內(nèi)的溫度不能以儀器設(shè)置溫度為標(biāo)準(zhǔn),不同廠家的儀器之間加熱效率也會(huì)有所不同,所以單說裂解這一步,就需要對(duì)上機(jī)的體系進(jìn)行更多的優(yōu)化。

                 2、儀器孔位之間提取效率有所差異

                 孔間差異是儀器應(yīng)當(dāng)重視的問題,磁棒式全自動(dòng)核酸提取儀通常采用卡片或彈簧鋼珠固定96孔深孔板,并且大部分儀器,底部都會(huì)有凹形槽的加熱條,在進(jìn)行加熱時(shí),如果深孔板的孔位與底部加熱凹槽貼合的不緊密,會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,這種情況導(dǎo)致孔位間的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定是隨機(jī)出現(xiàn)的。如果發(fā)現(xiàn)某一固定孔位的提取結(jié)果總是與其他孔位相差比較大,可以考慮儀器加熱模塊是否有問題,同時(shí)觀察該孔位的上游裂解孔位內(nèi)是否有磁珠殘留,可用空白樣本檢測(cè)儀器在孔位間的轉(zhuǎn)移磁珠能力是否徹底。

                 3、上機(jī)提取時(shí)加入的洗脫液體積與實(shí)際得到的核酸溶液體積存在顯著差異

                 目前市場(chǎng)大多數(shù)的磁棒式全自動(dòng)核酸提取儀的加熱模塊位于96孔深孔板的***、六、七、十二列,***、第七列絕大多數(shù)作為裂解結(jié)合孔位使用,而第六、第十二列作為洗脫孔位使用,由于大多數(shù)的提取實(shí)驗(yàn)在裂解結(jié)合步驟需要加熱、而第六列與第七列相鄰,由于熱傳導(dǎo)效應(yīng)的存在,使得裂解加熱時(shí)同樣也會(huì)導(dǎo)致位于第六列內(nèi)的洗脫液溫度升高,從而導(dǎo)致洗脫液蒸發(fā),由于洗脫液的體積較小(50ul-200ul),使得實(shí)際得到的核酸溶液體積相比于加入的洗脫液體系有較大差異。

                 綜上,在實(shí)際操作中,手工方案一般無法照搬***上機(jī)方案中,需要根據(jù)儀器、耗材、試劑的配合情況進(jìn)行細(xì)節(jié)上的優(yōu)化,為了提***率,建議廣大用戶使用成熟的核酸自動(dòng)化提取方案,吉恩特生物現(xiàn)有各類常見生物材料的自動(dòng)化DNA提取成熟方案,提取效率高,穩(wěn)定性好,歡迎各位老師咨詢與討論。

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